Vörur
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR greiningarbúnaður fyrir 2019-nCoV
Væntanleg notkun
Þetta sett er notað til eigindlegrar greiningar á nýrri kórónuveiru (2019-nCoV) með því að nota hálssýni, nefkokssýni, berkjuskolvatn og hráka. Niðurstöður greiningar þessarar vöru eru eingöngu til klínískrar viðmiðunar og ættu ekki að vera notaðar sem einu sönnunargögn fyrir klíníska greiningu og meðferð. Mælt er með ítarlegri greiningu á ástandinu ásamt klínískum einkennum sjúklingsins og öðrum rannsóknarstofuprófum.
Skoðunarregla
Settið byggir á eins-þreps RT-PCR tækni. Reyndar voru ORF1ab og N genin fyrir nýja kórónuveiruna frá 2019 (2019-nCoV) valin sem markmiðssvæði fyrir mögnun. Sérstakir praimerar og flúrljómandi rannsakar (N genrannsakar eru merktir með FAM og ORF1ab rannsakar eru merktir með HEX) eru hannaðir til að greina RNA af nýrri gerð kórónuveirunnar frá 2019 í sýnum. Settið inniheldur einnig innrænt innra eftirlitskerfi (innra eftirlitsgenrannsakar merktur með CY5) til að fylgjast með ferli sýnatöku, RNA og PCR mögnunar og þar með draga úr fölskum neikvæðum niðurstöðum.
Helstu íhlutir
| Íhlutir | Hljóðstyrkur(48 tonn/sett） |
| RT-PCR viðbragðslausn | 96µl |
| nCOV grunnur TaqMan prófunarblanda（ORF1ab, N gen, RNAseP gen） | 864µl |
| Neikvæð stjórn | 1500µl |
| nCOV jákvæð stjórn（l ORF1ab N gen） | 1500µl |
Eigin hvarfefni: RNA útdráttur eða hreinsunarhvarfefni. Neikvæð/jákvæð samanburður: Jákvæða samanburðurinn er RNA sem inniheldur markbrotið, en neikvæða samanburðurinn er kjarnsýrulaust vatn. Þau ættu að taka þátt í útdrættinum við notkun og ættu að vera talin smitandi. Þau skulu meðhöndluð og fargað í samræmi við viðeigandi reglugerðir.
Innra viðmiðunargenið er RnaseP genið hjá mönnum.
Geymsluskilyrði og gildistími
-20 ± 5 ℃, forðastu endurtekna frystingu og þíðingu meira en 5 sinnum, gildir í 6 mánuði.
Viðeigandi tæki
Með FAM / HEX / CY5 og öðrum fjölrása flúrljómandi PCR tækjum.
Kröfur um sýnishorn
1. Viðeigandi sýnategundir: hálssýni, nefkokssýni, berkjuskolunarvökvi, hráki.
2. Sýnataka (smitgát)
Kokprufa: Þurrkið hálskirtlana og aftari kokvegginn með tveimur prufum í einu og setjið síðan hausinn í tilraunaglas sem inniheldur sýnatökulausnina.
Hráka: Eftir djúpan hósta skal safna hóstaða hrákanum í tilraunaglas með skrúftappa sem inniheldur sýnatökulausnina; berkjuskolunarvökva: Sýnataka af læknum. 3. Geymsla og flutningur sýna
Sýni til einangrunar veira og RNA-prófunar ætti að prófa eins fljótt og auðið er. Sýni sem greina má innan sólarhrings má geyma við 4°C; þau sem ekki greina má innan sólarhrings...
klukkustundir ættu að vera geymdar við -70°C eða lægra (ef geymsluskilyrðin eru ekki -70°C ættu þau að vera
Geymist tímabundið við -20°C kæli). Forðast skal að frysta og þíða sýnin endurtekið meðan á flutningi stendur. Senda skal sýnin á rannsóknarstofu eins fljótt og auðið er eftir töku. Ef flytja þarf sýni langar leiðir er mælt með geymslu á þurrís.
Prófunaraðferðir
1 Sýnisvinnsla og RNA útdráttur (sýnisvinnslusvæði)
Mælt er með að taka 200 μl af vökvasýni fyrir RNA útdrátt. Nánari upplýsingar um útdráttarskref er að finna í leiðbeiningum fyrir hefðbundin RNA útdráttarsett. Bæði neikvæð og neikvæð próf
Stjórntækin í þessu setti tóku þátt í útdráttinum.
2 Undirbúningur PCR hvarfefnis (svæði fyrir undirbúning hvarfefnis)
2.1 Takið alla íhluti úr búnaðinum og þiðið og blandið við stofuhita. Skilvindið við 8.000 snúninga á mínútu í nokkrar sekúndur fyrir notkun; reiknað út nauðsynlegt magn hvarfefna og hvarfkerfið er útbúið eins og sýnt er í eftirfarandi töflu:
| Íhlutir | N skammtur (25µl kerfi) |
| nCOV grunnur TaqMan prófunarblanda | 18 µl × N |
| RT-PCR viðbragðslausn | 2 µl × N |
| *N = fjöldi prófaðra sýna + 1 (neikvæð viðmiðun) + 1 (nCOVjákvæð viðmiðun) | |
2.2 Eftir að íhlutunum hefur verið blandað vel saman skal skilvinda í stutta stund svo að allur vökvinn á veggjum rörsins falli niður á botn rörsins og síðan setja 20 µl magnunarkerfið í PCR rörið.
3 Sýnataka (svæði fyrir undirbúning sýna)
Bætið 5 μl af neikvæðu og jákvæðu samanburðarprófunum út í eftir útdrátt. RNA úr sýninu sem á að prófa er bætt í PCR-viðbragðsrörið.
Lokið glasinu þétt og skiljið það við 8.000 snúninga á mínútu í nokkrar sekúndur áður en það er fært yfir á mögnunargreiningarsvæðið.
4 PCR mögnun (magnað greiningarsvæði)
4.1 Setjið hvarfrörið í sýnishornshólf tækisins og stillið færibreyturnar á eftirfarandi hátt:
| sviðið | Hringrás númer | Hitastig(°C) | Tími | safnsíða |
| Öfugumritun | 1 | 42 | 10 mín. | - |
| For-afnmyndunn | 1 | 95 | 1 mín. | - |
| Hringrás | 45 | 95 | 15 sekúndur | - |
| 60 | 30. áratugurinn | gagnasöfnun |
Val á rás fyrir greiningu tækja: Veldu FAM, HEX og CY5 rásina fyrir flúrljómunarmerkið. Fyrir viðmiðunarflúrljómun NONE, vinsamlegast veldu ekki ROX.
5 Niðurstöðugreining (Vinsamlegast vísið til tilraunaleiðbeininga hvers tækis varðandi stillingar)
Eftir viðbrögðin skal vista niðurstöðurnar. Eftir greiningu skal stilla upphafsgildi, lokagildi og þröskuldsgildi grunnlínunnar í samræmi við myndina (notandinn getur aðlagað eftir raunverulegum aðstæðum, upphafsgildið er hægt að stilla á 3~15, lokagildið er hægt að stilla á 5~20, aðlögun) í lógaritmíska grafinu. Við þröskuld gluggans er þröskuldslínan í lógaritmískum fasa og mögnunarkúrfan fyrir neikvæða stjórnina er bein lína eða fyrir neðan þröskuldslínuna.
6 Gæðastýring (prófunin felur í sér aðferðastýringu) Neikvæð stýring: Engin augljós mögnunarkúrfa fyrir FAM, HEX, CY5 greiningarrásir
COV jákvætt viðmið: augljós mögnunarkúrfa fyrir FAM og HEX greiningarrásir, Ct gildi ≤32, en engin mögnunarkúrfa fyrir CY5 rás;
Ofangreindum kröfum verður að uppfylla samtímis í sömu tilraun; annars er tilraunin ógild og þarf að endurtaka hana.
7 Ákvörðun niðurstaðna.
7.1 Ef engin mögnunarkúrfa er til staðar eða Ct-gildi > 40 í FAM og HEX rásum prófsýnisins, en mögnunarkúrfa er til staðar í CY5 rásinni, má álykta að ekkert RNA frá nýju kórónuveirunni frá 2019 (2019-nCoV) sé í sýninu;
.2 Ef sýnið hefur greinilega mögnunarferla í FAM og HEX rásunum og Ct gildið er ≤40, má meta að sýnið sé jákvætt fyrir nýju kórónuveiruna frá 2019 (2019-nCoV).
7.3 Ef sýnið sýnir skýra mögnunarferil aðeins í annarri rás FAM eða HEX, og Ct gildið er ≤40, og engin mögnunarferill er í hinni rásinni, þarf að endurprófa niðurstöðurnar. Ef endurprófunarniðurstöðurnar eru samræmdar, má meta sýnið sem jákvætt fyrir nýja
Kórónaveiran 2019 (2019-nCoV). Ef niðurstaða endurprófunar er neikvæð má meta að sýnið sé neikvætt fyrir nýju kórónaveiruna 2019 (2019-nCoV).
Jákvætt dómgildi
ROC-kúrfuaðferðin er notuð til að ákvarða viðmiðunar-CT-gildi búnaðarins og viðmiðunargildi innri stjórnunar eru 40.
Túlkun á niðurstöðum prófunar
1. Hver tilraun ætti að vera prófuð fyrir neikvæða og jákvæða samanburðarhópa. Niðurstöður prófsins er aðeins hægt að ákvarða þegar samanburðarhópar uppfylla kröfur um gæðaeftirlit.
2. Þegar FAM og HEX greiningarrásirnar eru jákvæðar, getur niðurstaðan frá CY5 rásinni (innri stjórnrás) verið neikvæð vegna kerfissamkeppni.
3. Þegar niðurstaða innri eftirlits er neikvæð, og FAM og HEX greiningarrásir tilraunaglassins eru einnig neikvæðar, þýðir það að kerfið er óvirkt eða aðgerðin er röng, og prófið er ógilt. Þess vegna þarf að prófa sýnin aftur.
