Vörur
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR greiningarsett fyrir 2019-nCoV
Áætluð notkun
Þetta sett er notað til eigindlegrar uppgötvunar nýrrar kransæðaveiru (2019-nCoV) með því að nota hálsþurrkur, nefkoksþurrkur, berkju- og lungnaskolunarvökva, hráka. Niðurstöður greiningar þessarar vöru er aðeins til klínískrar viðmiðunar og ætti ekki að nota sem eina vísbendingar um klíníska greiningu og meðferð. Mælt er með yfirgripsmikilli greiningu á ástandinu ásamt klínískum einkennum sjúklingsins og öðrum rannsóknarstofuprófum.
Skoðunarregla
Settið er byggt á eins þrepa RT-PCR tækni.Reyndar voru 2019 nýja kórónavírusinn (2019-nCoV) ORF1ab og N genin valin sem mögnunarmarksvæði.Sérstakir grunnar og flúrljómandi rannsaka (N gena rannsakar eru merktir með FAM og ORF1ab rannsakar eru merktir með HEX) eru hannaðir til að greina 2019 nýrri gerð kransæðavírus RNA í sýnum.Settið inniheldur einnig innrænt innra eftirlitsgreiningarkerfi (innra eftirlitsgenrannsókn merkt með CY5) til að fylgjast með ferli sýnasöfnunar, RNA og PCR mögnun og dregur þannig úr fölskum neikvæðum niðurstöðum.
Helstu þættir
| Íhlutir | Bindi（48T/sett） |
| RT-PCR hvarflausn | 96 µl |
| nCOV grunnur TaqMan prófunarblanda（ORF1ab, N gen, RNAseP gen） | 864 µl |
| Neikvæð stjórn | 1500 µl |
| nCOV jákvæð stjórn（l ORF1ab N gen） | 1500 µl |
Eigin hvarfefni: RNA útdráttar- eða hreinsunarhvarfefni.Neikvæð/jákvæð viðmiðun: Jákvæði samanburðurinn er RNA sem inniheldur markbútinn, en neikvæða viðmiðið er kjarnsýrulaust vatn.Meðan á notkun stendur ættu þau að taka þátt í útdrættinum og ætti að teljast smitandi.Meðhöndla skal og farga þeim í samræmi við viðeigandi reglur.
Innra viðmiðunargenið er RNAseP genið úr mönnum.
Geymsluskilyrði og fyrningardagsetning
-20±5 ℃, forðastu endurtekna frystingu og þíðingu oftar en 5 sinnum, gildir í 6 mánuði.
Gildandi hljóðfæri
Með FAM / HEX / CY5 og öðru fjölrása flúrljómandi PCR tæki.
Kröfur um sýnishorn
1. Viðeigandi sýnishorn: hálsþurrkur, nefkoksþurrkur, berkju- og lungnaskolunarvökvi, hráki.
2. Sýnasöfnun (smitgátstækni）
Kokþurrkur: Þurrkaðu hálskirtla og aftari kokvegg með tveimur þurrkum á sama tíma, dýfðu síðan þurrkuhausnum í tilraunaglas sem inniheldur sýnatökulausnina
Sputum: Eftir að sjúklingurinn er með djúpan hósta, safnaðu hóstasputumnum í tilraunaglas með skrúfloka sem inniheldur sýnatökulausnina;berkju- og lungnaskolunarvökvi: Sýnataka af læknum.3.Geymsla og flutningur sýna
Prófa skal sýni til veirueinangrunar og RNA prófunar eins fljótt og auðið er.Sýni sem hægt er að greina innan 24 klukkustunda er hægt að geyma við 4 ℃;þær sem ekki er hægt að greina innan 24
klukkustundir ætti að geyma við -70 ℃ eða lægri (ef það er ekki geymsluskilyrði sem er -70 ℃, ættu þær að vera
tímabundið geymt við -20 ℃ kæli).Sýni ættu að forðast endurtekna frystingu og þíðingu meðan á flutningi stendur.Sýnið skal senda til rannsóknarstofu eins fljótt og auðið er eftir söfnun.Ef flytja þarf sýni um langar vegalengdir er mælt með þurrísgeymslu.
Prófunaraðferðir
1 Sýnavinnsla og RNA útdráttur (sýnavinnslusvæði)
Mælt er með því að taka 200μl af vökvasýni til RNA útdráttar.Fyrir tengd útdráttarskref, vísa til leiðbeininga um RNA útdráttarsett í verslun.Bæði það neikvæða og neikvæða
stýringar í þessu setti tóku þátt í útdrættinum.
2 PCR hvarfefnisgerð (undirbúningssvæði fyrir hvarfefni)
2.1 Fjarlægðu alla íhluti úr settinu og þíðaðu og blandaðu saman við stofuhita.Miðflótta við 8.000 snúninga á mínútu í nokkrar sekúndur fyrir notkun;reiknaðu út nauðsynlegt magn hvarfefna og hvarfkerfið er útbúið eins og sýnt er í eftirfarandi töflu:
| Íhlutir | N skammtur (25µl kerfi) |
| nCOV grunnur TaqMan prófunarblanda | 18 µl × N |
| RT-PCR hvarflausn | 2 µl × N |
| *N = fjöldi prófaðra sýna + 1 (neikvæð viðmiðun) + 1 (nCOVjákvæð stjórn) | |
2.2 Eftir að íhlutunum hefur verið blandað vandlega saman skal skilvinda í stuttan tíma til að láta allan vökvann á rörveggnum falla niður á botn rörsins og síðan deila 20 µl mögnunarkerfinu í PCR rörið.
3 Sýnataka (sýnaundirbúningssvæði)
Bætið við 5μl af neikvæðu og jákvæðu viðmiðunum eftir útdrátt.RNA sýnisins sem á að prófa er bætt við PCR hvarfglasið.
Lokaðu túpunni vel og skildu við 8.000 snúninga á mínútu í nokkrar sekúndur áður en það er flutt á mögnunarskynjunarsvæðið.
4 PCR mögnun (magnað greiningarsvæði)
4.1 Settu hvarfglasið í sýnaklefa tækisins og stilltu færibreyturnar sem hér segir:
| stigi | Hringrás númer | Hitastig(°C) | Tími | söfnunsíða |
| Öfugtumritun | 1 | 42 | 10 mín | - |
| Pre-denaturation | 1 | 95 | 1 mín | - |
| Hringrás | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | gagnasafn |
Val á tækjaskynjunarrás: Veldu FAM、HEX、CY5 rásina fyrir flúrljómunarmerkið.Til viðmiðunar flúrljómandi ENGIN, vinsamlegast veldu ekki ROX.
5 Niðurstöðugreining (Vinsamlegast skoðaðu tilraunaleiðbeiningar hvers tækis til að stilla)
Eftir viðbrögðin skaltu vista niðurstöðurnar.Eftir greiningu skaltu stilla upphafsgildi, lokagildi og þröskuldsgildi grunnlínunnar í samræmi við myndina (notandinn getur stillt í samræmi við raunverulegar aðstæður, upphafsgildið er hægt að stilla á 3 ~ 15, lokagildið er hægt að stilla á 5~20, aðlögun) í lógaritmísku línuritinu Við þröskuld gluggans er þröskuldslínan í logaritmískum fasa og mögnunarferill neikvæðu stýringarinnar er bein lína eða undir þröskuldslínunni).
6 Quauty control (Verklagsstjórnun er innifalin í prófinu) Neikvæð stjórn: Engin augljós mögnunarferill fyrir FAM, HEX, CY5 greiningarrásirn
COV jákvæð stjórn: augljós mögnunarferill FAM og HEX greiningarrása, Ct gildi≤32, en engin mögnunarferill CY5 rásar;
Ofangreindar kröfur verða að uppfylla samtímis í sömu tilraun;annars er tilraunin ógild og þarf að endurtaka hana.
7 Ákvörðun niðurstaðna.
7.1 Ef það er engin mögnunarferill eða Ct gildi> 40 í FAM og HEX rásum prófunarsýnisins og það er mögnunarferill í CY5 rásinni, má dæma að það sé engin 2019 ný kransæðavírus (2019-nCoV) RNA í sýninu;
.2 Ef prófunarsýnið hefur augljósa mögnunarferla í FAM og HEX rásum og Ct gildið er ≤40, má dæma að sýnið sé jákvætt fyrir 2019 nýju kransæðaveirunni (2019-nCoV).
7.3 Ef prófunarsýnið hefur aðeins skýran mögnunarferil í einni rás FAM eða HEX, og Ct gildið er ≤40, og það er engin mögnunarferill í hinni rásinni, þarf að prófa niðurstöðurnar aftur.Ef niðurstöður endurprófunar eru í samræmi má dæma sýnið jákvætt fyrir hið nýja
kransæðavírus 2019 (2019-nCoV).Ef endurprófunarniðurstaðan er neikvæð má dæma að sýnið sé neikvætt fyrir 2019 nýja kórónavírus (2019-nCoV).
Jákvæð dómgildi
ROC ferilaðferðin er notuð til að ákvarða viðmiðunar CT gildi settsins og viðmiðunargildi innra eftirlits er 40.
Túlkun á niðurstöðum prófa
1.Hver tilraun ætti að vera prófuð með tilliti til neikvæðra og jákvæðra viðmiðunarhópa.Prófunarniðurstöður er aðeins hægt að ákvarða þegar eftirlit uppfyllir kröfur um gæðaeftirlit
2.Þegar FAM og HEX skynjunarrásirnar eru jákvæðar, getur niðurstaðan frá CY5 rásinni (innri stjórnunarrás) verið neikvæð vegna kerfissamkeppni.
3.Þegar niðurstaða innra eftirlits er neikvæð, ef FAM og HEX greiningarrásir tilraunaglassins eru einnig neikvæðar, þýðir það að kerfið er óvirkt eða aðgerðin er röng, t prófið er ógilt.Þess vegna þarf að prófa sýnin aftur.
